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50年代，美國W.H.Coulter在世界上研發(fā)了第一臺血液分析儀Automated hematology analyzer(AHA)?，F代血液分析儀按功能可分為：全血細胞計數、白細胞分類(lèi)、血細胞計數和分類(lèi)功能的擴展。

一、檢測原理及技術(shù)

 

1、電學(xué)檢測原理及技術(shù)

①電阻抗法原理

 

②儀器的組成和功能

信號發(fā)生器               

放大器

閾值調節器               

甄別器

整形器                     

 

計數器
放大→閾值調節→甄別→整形→計數

 

③電阻抗原理進(jìn)行血細胞計數和分類(lèi)原理圖（見(jiàn)下）

 

 

特點(diǎn)：是最早的血細胞計數理論

缺點(diǎn)：不能對單個(gè)細胞進(jìn)行系統分析，得出的參數為群體平均值。

 

 

2、射頻電導法

 

射頻指射頻電流，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。電導性即電的傳送性能。高頻電流能通過(guò)細胞壁,滲入細胞膜脂質(zhì)層可測定細胞的導電性，提供細胞內部化學(xué)成分、細胞核和細胞質(zhì)、顆粒成分等特征性信息。

 

用途：特別有助于鑒別體積雖相同、但內部結構性質(zhì)不同的細胞（或相似體積的顆粒）。

 

3、光（化）學(xué)檢測原理

 

激光散射法

①原理：處理細胞（稀釋、染色、球形化）→ 通過(guò)石英毛細管（激光束照射）→ 細胞產(chǎn)生與其特征相應的各種角度的散射光 → 周?chē)胁煌嵌鹊男盘枡z測器

 

不同結果角度代表的意義如下：

前向散射光（FSC）:數量和表面體積大小

側向散射光（SSC）:顆粒、細胞核等復雜性

散射熒光（FL）:FL1綠色，FL2橘紅色，FL3紅色

激光散射法是現代五分類(lèi)血液分析儀的主要檢測原理之一。

 

②基本組成

光源：氣體激光（氦-氖、氬氣等）、固體激光（半導體）、鎢光源（多色光）

鞘流：維持顆粒于液流中央，順序、單個(gè)、恒速向前流動(dòng)，即流體動(dòng)力學(xué)聚焦

細胞懸液：被檢測細胞（顆粒）的懸液，由氣壓導入流動(dòng)池

光檢測器：接受來(lái)自各種角度的散射光或吸收光信號，并轉換成相應特征的電信號

 

 

功能水平上對單個(gè)細胞進(jìn)行定量分析，可高速分析上萬(wàn)個(gè)細胞，并能同時(shí)從一個(gè)細胞中測得多個(gè)參數，是最先進(jìn)的細胞定量分析技術(shù)。

 

③網(wǎng)織紅細胞檢測原理

利用流式細胞儀（flow cytometer,FCM）的方法進(jìn)行網(wǎng)織紅細胞計數。因網(wǎng)織紅細胞的胞質(zhì)中尚殘留RNA,可與丫啶橙、哌若寧-Y、噻唑橙等染料結合，應用FCM測量發(fā)出的特定顏色熒光，進(jìn)行RNA定量。

 

分光光度法

①原理：遵循Lambert-Beer比色定律，即吸光度A與液體物質(zhì)濃度C成正比。

②組成：?jiǎn)紊庠?、檢測池和比色容器、光檢測器。

③血紅蛋白測定：溶血劑→ 紅細胞溶解 → Hb → 與溶血劑中某些成分結合 → 穩定的血紅蛋白衍生物 → 530～550nm → 比色。

 

4、不同的儀器組合應用電學(xué)、光、化學(xué)檢測技術(shù)

 

血液分析儀常用檢驗參數的原理和技術(shù)

 

 

 

 

白細胞五分類(lèi)計數及相關(guān)參數檢測

①過(guò)氧化物酶（peroxidase）染色通道檢測原理

 

 

②體積、電導和光散射（VCS）法

VCS：Volume，Conductivity，lightScatter

電阻抗技術(shù) →細胞體積、數量

電導技術(shù)→ 內部結構性質(zhì)不同的細胞

光散射技術(shù) →細胞內的顆粒性、核分葉性、核表面結構

 

 

 

VCS技術(shù)下各種白細胞群的特征

 

③多角度偏振光散射法（MAPSS）

 

 

血標本經(jīng)鞘液稀釋后→WBC近似自然狀態(tài)→Hb溢出，鞘流水分子則進(jìn)入RBC →不干擾白細胞檢測→多角度偏振光散射法分4個(gè)角度檢測

0°：反映細胞大小，同時(shí)檢測細胞數量

7°：反映細胞內部結構及核染色質(zhì)的復雜性。

90°：反映細胞內部顆粒及分葉狀況。

 

90°D：在光散射過(guò)程中，嗜酸性粒細胞顆粒豐富，可去偏振光，與中性粒細胞鑒別。

優(yōu)點(diǎn)：可鑒別白細胞亞群、異常細胞類(lèi)型；白細胞分類(lèi)不受有核紅細胞、血小板凝聚、不溶解紅細胞和細胞碎片等干擾物質(zhì)影響。

 

成熟紅細胞系列參數檢測原理

電阻抗法

流式細胞術(shù)、鞘流電阻抗法

流式細胞術(shù)激光散射法

電阻抗法和光散射法

 

血小板系列參數檢測原理

電阻抗法

流式細胞激光核酸熒光染色和電阻抗法

激光散射法

固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法 

 

網(wǎng)織紅細胞系列參數檢測原理

非熒光染料染色法：新亞甲藍

熒光染料染色法：噁嗪、堿性槐黃O、聚次甲基、噻唑橙、氧氮雜芑750等。

 

 

有核紅細胞系列參數檢測原理

VCS法

流式激光/熒光染色法

白細胞計數和分類(lèi)通道衍生法

阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細胞術(shù)

 

 

二、結果顯示

 

1、數據

 

 

 

2、圖形

 

血細胞直方圖:

即細胞體積分布圖形，橫坐標為細胞體積大小，縱坐標為一定體積的細胞數目。

①白細胞直方圖

 

②紅細胞直方圖

③血小板直方圖

 

散點(diǎn)圖：

平面散點(diǎn)圖只顯示2維（X、Y軸）圖像，在坐標系，X軸和Y軸分別表示一種檢測原理或檢測角度的細胞信息，在坐標象限中的任何一個(gè)散點(diǎn)反映的就是X軸和Y軸的綜合信息。

在不同的檢測原理下，坐標上散點(diǎn)的位置如：上下（高低）、左右、前后（可重疊）或散點(diǎn)群的疏密，均與相應類(lèi)別的細胞外形、體積大小、內部結構、胞核胞質(zhì)、顆粒數量等理化特性密切相關(guān)。

異常散點(diǎn)圖包括病理性和非病理性干擾物質(zhì)的影響，散點(diǎn)圖需要結合臨床和檢驗分析前、中、后仔細分析，作出合理的解釋。

 

3、臨床意義

 

紅細胞參數

①紅細胞體積分布紅細胞參數寬度（RDW）

 

 

②紅細胞血紅蛋白分布寬度（HDW）

HDW反映紅細胞內HGB含量異質(zhì)性的參數，HDW和RDW明顯增高，見(jiàn)于遺傳性球形紅細胞增多癥，屬于小細胞不均一性高色素性貧血。HDW對鐮形細胞貧血、β-輕型珠蛋白生成障礙性貧血也有一定診斷意義。

 

③有核紅細胞（NRBC）

新生兒、胎兒可見(jiàn)，健康成人不見(jiàn)

 

網(wǎng)織紅細胞參數

①未成熟網(wǎng)織紅細胞比率IRF

概念：是指幼稚的或未成熟的網(wǎng)織紅細（即含高RNA的網(wǎng)織紅細胞）與總的網(wǎng)織 紅細胞的比值，既IRF= （MFR+HFR）/（LFR+MFR+HFR)

意義：骨髓抑制時(shí)，HFR、MFR減低（IFR）早于LFR、N、PLT；恢復時(shí)HFR、MFR （IFR）迅速增高。

②網(wǎng)織紅細胞成熟指數RMI

公式：RMI=（MFR+HFR)/LFR

評價(jià)：增高：常見(jiàn)于溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、白血病、真性紅細胞增多癥和多發(fā)性骨髓瘤。

減低：常見(jiàn)于與骨髓衰竭或無(wú)效造血有關(guān)，如巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血。

③網(wǎng)織紅細胞血紅蛋白量RET-He

概念：指網(wǎng)織紅細胞內血紅蛋白的含量  

公式：CHr=MRV × CHCMr

評價(jià)：反映網(wǎng)織紅細胞的質(zhì)量變化，Ret-He達30.5pg為患者需要補充鐵的最佳臨界值，其靈敏度和特異性高，與CHr有很好的相關(guān)性。

④網(wǎng)織紅細胞平均血紅蛋白量CHr

概念：平均每個(gè)網(wǎng)織紅細胞所含血紅蛋白的量  

公式：CHr=MRV × CHCMr，單位：pg

評價(jià)：反映網(wǎng)織紅細胞內的鐵含量，可實(shí)時(shí)評價(jià)骨髓紅系的功能狀態(tài)。

白細胞參數

①中間細胞群

MID是三分群血液分析儀指標，一般包括正常時(shí)的Mon、E、B；病理時(shí)的各種原始幼稚細胞、異型淋巴細胞、漿細胞等。MID計數異?；驁缶?，需特別注意進(jìn)行血涂片復查。由于各種儀器使用的稀釋液和溶血劑白細胞膜作用不一，因此，中間細胞群的確切細胞組成并不明確。

 

②未成熟粒細胞

IG主要包括St、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞，但不包括原始粒細胞。有助于篩檢、監測白血病反應、嚴重或慢性感染、炎癥、腫瘤、MDS、組織壞死。血培養陽(yáng)性、IG%高于血培養陰性者，但靈敏度尚不足以用于預測感染或菌血癥，IG超過(guò)3%，對指示敗血癥非常特異，有助于微生物檢測評價(jià)。

 

③造血祖細胞

HPC是反映以CD34陽(yáng)性的造血祖細胞為主的參數，特別適合于外周造血干細胞移植過(guò)程，監測供體在接受藥物作用后外周血中造血干細胞的變化，便于選擇采集時(shí)機。

 

 

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