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凝血檢測的誤差來(lái)源

發(fā)表時(shí)間:2019-11-12

存在凝血紊亂的病人可能出血或可能栓塞。凝血涉及凝血因子和血小板的激活。評估血小板事件, 可通過(guò)包括CBC計數,外周血涂片的檢查,出血時(shí)間的檢查和血小板聚集測試。評估凝血因子 典型地靠PT和APTT來(lái)看,異常的PT或aPTT可通過(guò)使用糾正實(shí)驗來(lái)確定由于因子缺乏還是抑制 物引起的。如果延長(cháng)的時(shí)間在糾正實(shí)驗中得到糾正,則進(jìn)行因子檢測識別哪個(gè)因子缺乏。抑制物 則包括某些特定因子的抑制物和狼瘡抗凝物,所以未得到糾正的應篩查一下。一般凝血檢查均采 用枸椽酸鈉抗凝管。本節講述各種影響凝血檢測結果的干擾因素。

 

 

1. PT和APTT檢測的誤差 

一般因子僅是輕微減少,不會(huì )影響導致凝血時(shí)間延長(cháng),只有比正常范圍減少20%-40%時(shí),才可 能導致凝血時(shí)間延長(cháng)。光學(xué)法的PT和APTT可能受高脂血,黃疸血影響而時(shí)間縮短。未適當離心 的血漿可能存在PF4,當使用APTT監測肝素時(shí),PF4可與肝素結合,導致假性APTT縮短。同時(shí) FVIII是急性時(shí)相反應蛋白,如果病人在急性炎癥期,可能FVIII急劇升高,導致APTT假性縮短。

 

2. 凝血酶時(shí)間TT檢測的誤差 

凝血酶時(shí)間即測量纖維蛋白原轉化形成(交聯(lián))纖維蛋白的時(shí)間。纖維蛋白血癥,FDP 水平升高,和異常蛋白可干擾纖維蛋白的交聯(lián)從而導致假性TT延長(cháng)。淀粉樣變性可抑制 纖維蛋白原轉化成纖維蛋白,也可導致TT延長(cháng)。在一些嚴重疾病,如存在肝素類(lèi)抗凝物 可導致TT延長(cháng)。

 

 

下面會(huì )詳細介紹實(shí)驗室中凝血特定檢測的常見(jiàn)干擾因素。1. 抗凝比例不對 枸椽酸抗凝管血液與抗凝劑比例為9:1的比例。充盈不足或過(guò)度可導致凝血時(shí)間檢測的 異常。

HCT大于 55% 或小于21%時(shí)候,需要用以下公式修正: C= 0.00185 X(100 H)X VC 是3.2%枸椽酸鈉的量,以mL計,H 是HCT的值V 是血量,以mL計

 

2. 稀釋或抗凝劑的污染 

從留置管或導管中收集的血樣本可能存在檢測干擾。樣本被沖洗管路或溶血可影響凝血檢測 結果。如必須要從內置導管中收集血液,要避免從肝素化導管采集。 如果必須從肝素化的導管收集,采集前確保要足夠的沖洗。NCCLS 標準建議使用 5mL 生 理鹽水進(jìn)行沖洗。收集前需至少使用 5mL 或 6 倍的導管的死腔量排出丟棄。血管護理標準 和實(shí)踐指南關(guān)于死腔量的使用推薦遵從制造商的說(shuō)明書(shū)。此指南同時(shí)描述了血液不應從各種 不同類(lèi)型的內置導管收集,靜脈注射裝置,和內置的心血管或臍帶中收集。即使新人死腔量 的的規定,樣本從肝素化的導管中采集容易被肝素污染。從而,最好從外周血中采集,避免 肝素,水蛭素,或阿加曲班注射治療用的手臂側采集。在凝血檢測前,肝素可被使用的聚凝 胺中和或去除;然而,殘留的肝素可能干擾到檢測。通過(guò)增強抗凝血酶活性,肝素抑制活化 的 FII,FX,FIX,FXI,FXII 和激肽 K。相比,重組水蛭素,達那肝素,和阿加曲班僅抑制 活化的 FII。這些抗凝劑(肝素,重組水蛭素,和阿加曲班)可導致 APTT 延長(cháng),并干擾凝 血檢測如因子檢測和狼瘡抗凝物檢測。因子檢測可產(chǎn)生假性減低,而狼瘡抗凝物可產(chǎn)生假陽(yáng)性。

 

3. 創(chuàng )傷性失血創(chuàng )傷性失血可導致人為的凝血檢測 PT 和 APTT 的縮短。

這是因為內皮細胞釋放組織因子后 過(guò)度的激活凝血因子和血小板。正確的采集技術(shù)可避免此操作的組織因子混入從而避免此人 為的干擾。

 

4. 類(lèi)風(fēng)濕因子

RF纖溶過(guò)程是由纖溶酶介導,并降解纖維蛋白凝塊成為 D-二聚體和 FDP 的過(guò)程。纖溶同時(shí)也 降解完整的纖維蛋白原,產(chǎn)生 FDP。纖維蛋白降解產(chǎn)物和纖維蛋白原降解產(chǎn)物稱(chēng)為 FDPs 或 FSPs.檢測 D-二聚體和 FDP 使用的是半定量或定量的免疫法。 乳膠凝集法:病人血漿與包被了抗-FDP 抗體的乳膠顆?;旌?。如果存在 FDP,則會(huì )與乳膠 顆粒中的 FDP 抗體結合。結合后聚集物可被觀(guān)察到。不同稀釋度的病人血漿可以被半定量 方法測量則為 FDP 滴度。乳膠凝集檢測同樣可用于 D-二聚體,不僅是技術(shù)員的肉眼觀(guān)察, 也可以凝血分析儀上測量濁度。ELISA 方法:定量的 ELISA 檢測可用于 FDP 和 D-二聚體。傳統 ELISA 檢測方法較精確, 但因為分析時(shí)間較長(cháng)不常用?,F在也有自動(dòng)化的 ELISA 檢測(VIDAS, bioMérieux, Durham, NC).D-dimer and FDP 檢測一個(gè)重要的干擾是 RF 的干擾??蓪е录訇?yáng)性結果。如果 PT, aPTT, TT, and fibrinogen 均正常,而 D-dimer and FDP 檢測升高很可能即出現此干擾。

 

5. 脂血,溶血或血小板減少樣本的血小板聚集檢測

 血小板聚集測量血小板的相互粘附形成止血團塊的能力,是一期止血的關(guān)鍵成分??梢杂酶?血小板血漿或全血進(jìn)行。膠原,瑞斯托霉素,花生四烯酸,二磷酸腺苷,腎上腺素,和凝血 酶可以刺激血小板因而誘導聚集。對激動(dòng)劑的響應可提供對血小板功能紊亂的類(lèi)型。測量聚 集的響應一般是基于樣本的透光性改變而測量 血小板聚集可受一些因素的影響。脂血和溶血標本可使聚集檢測困難,由于其使聚集的透光 改變減少。血小板減少也可使聚集評估很難,由于低血小板計數本身可產(chǎn)生異常聚集類(lèi)型。

6. 抗凝物或狼瘡抗凝物檢測的干擾

ISTH 狼瘡抗凝物分支委員會(huì )推薦用兩個(gè)敏感的針對狼瘡抗凝物的檢測以評估不同凝血途徑 的成分。這是基于凝血時(shí)間的 dRVVT,和基于 APTT 的白陶土凝血檢測,和稀釋凝血酶原 時(shí)間(組織因子通路抑制測試)。狼瘡抗凝物可使磷脂依賴(lài)的凝血檢測的時(shí)間延長(cháng)。因為其 結合磷脂因此干擾磷酯在凝血瀑布學(xué)說(shuō)中的作用。狼瘡抗凝物篩查通過(guò) 使用一個(gè)低濃度的 磷脂以增強敏感性,任何異常篩查實(shí)驗結果(延長(cháng))一般需要 1:1 混合實(shí)驗以顯示凝血時(shí) 間依然延長(cháng)。確認實(shí)驗一般是加入過(guò)量的磷脂,凝血時(shí)間則顯示縮短至正常趨勢。血小板中 和實(shí)驗(PNP)是一個(gè)確認檢測,冷凍-融解的血小板提供過(guò)量的磷脂。六邊相的磷脂中和 實(shí)驗也同樣基于相同的原理—即,凝血時(shí)間可能不被糾正,在磷脂的六相期時(shí)。需要關(guān)注的 是 APTT 可能會(huì )或不會(huì )延長(cháng),基于試用中磷脂的量多少。 在很多的抗凝物檢測中,肝素(包括皮下注射低劑量肝素)可以引起假陽(yáng)性狼瘡抗凝物檢測 結果。肝素抑制活性 FII,X,IX,XI,XII 和激酶 K。因此,凝血時(shí)間如 PT 和 APTT 延長(cháng), 同時(shí)可被狼瘡抗凝物干擾。重組水蛭素,達那肝素,阿加曲班抑制活化的 II 因子和同時(shí)使 凝血時(shí)間延長(cháng)。在凝血檢測開(kāi)始前,可去除肝素或用聚凝胺中和;然而殘留的肝素可繼續造 成檢測的干擾。在香豆素類(lèi)抗凝的樣本不影響狼瘡抗凝物檢測結果。

以下是簡(jiǎn)要總結,

 

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